OSN-SAbstraktOSN-E

Stanovení aktivovaného parciálního tromboplastinového času.

Funkce vnitřní cesty aktivace přeměny protrombinu na trombin – aktivace látkou na bázi křemičitanu.

 

OSN-SSeznam souvisejících dokumentů

OSN-E

 

OSN-SKódy, názvy, definice a terminologieOSN-E

NČLP:

03456      APTT (P, čas [s], koagulace)03461   APTT-kontrola (P, čas [s],koagulace)03465    APTT-ratio (P, rel. čas [1], výpočet)

Seznam zdravotnických výkonů

96621      Aktivovaný parciální tromboplastinový test APTT

97111      Příprava plazmy a séra centrifugací

 

OSN-SPrincipOSN-E

V přítomnosti purifikovaných fosfolipidů destičkového typu (ROAAMkefalin), kalcia a povrchového aktivátoru na bázi křemičitanů dochází v plazmě chudé na destičky k aktivaci mediátorů vnitřní cesty přeměny protrombinu na trombin. Vzniklý trombin aktivuje následně přeměnu fibrinogenu na fibrin a posléze na nerozpustný fibrin.

 

OSN-SMísto provádění postupuOSN-E

Oddělení klinické biochemie Psychiatrické léčebny v Opavě, pracoviště hematologie

 

OSN-SBezpečnostní aspektyOSN-E

Viz  ”Směrnice o bezpečnosti práce”. OSN-E

 

OSN-SFáze před vyšetřenímOSN-E

Základní koagulační test monitorující vnitřní cestu aktivace přeměny protrombinu na trombin.

 

OSN-SOdběr primárního vzorku a transportOSN-E

Odebere se 9 dílů krve do zkumavky z umělé hmoty s 1 dílem 0,109 mol/l (3,2%) citrátu sodného.

Počet zkumavek: 1

Minimální objem odběrové zkumavky: 3 ml. 

Odebraný materiál je nutné co nejrychleji transportovat do laboratoře při teplotě 18-25 °C, nejdéle do dvou hodin od odběru.

 

OSN-SOmezeníOSN-E

Laboratoř vzorky nepřijme nebo neprovede vyšetření za podmínek uvedených v dokumentu  „Odmítnutí přijetí biologického materiálu k laboratornímu vyšetření“.

 

OSN-SManipulace se vzorkyOSN-E

Příjem vzorku laboratoří: identifikace materiálu, zadání do LIrS (přiřazení identifikačního čísla laboratoře).

Centrifugace citrátové krve: centrifugujeme 15 minut při 4000 otáčkách/min (přibližně 3000 g).  Po odběru je plazma stabilní při 20 °C 4 hodiny, při heparinové terapii pouze 2 hodiny. Plazma nesmí být skladována v lednici!

 

OSN-SPřístroje a pomůckyOSN-E

Centrifuga Eppendorf, automatický koagulometr Sysmex CA-540.

 

OSN-SReagencieOSN-E

Set: PTT- Automate 5

Katalogové číslo: 00482, Diagnostica Stago

Balení: 12 x 10 ml reagencie PTT-Automate (lyofilizovaná směs fosfolipidů z mozkové tkáně v pufrované suspenzi křemičitanového aktivátoru s přidanými stabilizátory)

 

Reagencie neobsažené v setu:

CaCl2 0,025 mol/l 

 

Stabilita:

Set PTT-Automate

2-8 °C

do exspirace

Naředěná reagencie APTT

15-19 °C

96 hodin

Naředěná reagencie APTT

2-8 °C

7 dní

0,025 mol/l CaCl2 (po otevření)

15-19 °C

3 dny

 

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

Štítky s čárovými kódy, kyvetky do koagulometru

 

OSN-SPříprava k činnostiOSN-E

Příprava reagencií:Obsah lahvičky reagencie PTT-Automate rozpustit v 10 ml vody pro injekce. Nechat stát nejméně 60 minut při laboratorní teplotě a poté reagencii intenzivně protřepat.Roztok kalcia je připraven k použití.

Identifikace reagencie v koagulometru:

APTT reagencie:

ID: PTTAUT        

Název: PTT AUTOMATE                 

Stabilita: 96 hod Roztok CaCl2:

 

OSN-SPracovní postupOSN-E

Provedeme identifikaci vzorků, zkumavku s vyšetřovanou plazmou vložíme do přístroje. Metodicky se postupuje dle návodu přístroje

 

Nastavení automatického koagulometru

 

Plazma

50 µl

 

Reagencie PTT-Automate

50 µl

 

Inkubace (37 °C)

240 s

 

0,025 mol/l CaCl2

50 µl

 

Ihned po přidání kalcia začít měřit koagulační čas

 

 

OSN-SStručný popis postupuOSN-E

 

 

OSN-SKalibrace a návaznostOSN-E

Nejméně 5x změříme referenční plazmu s deklarovaným rozmezím hodnot APTT, vypočítáme průměr a tuto hodnotu použijeme k výpočtu poměru.

 

Reagencie pro kalibraci:

Unicalibrator, katalogové č. 00625, Diagnostica Stago

Balení: 6 x 1 ml

Příprava: obsah lahvičky naředit 1 ml vody pro injekce, nechat stát 30 minut při laboratorní teplotě a poté jemně protřepat

 

Stabilita:

 

Unicalibrator (naředěný)

15-19 °C

4 hodiny

 

OSN-SCharakteristika spolehlivostiOSN-E

Rozsah měření: 20-180 s

 

OSN-SDokumentace, zpracování dat a vydávání výsledkůOSN-E

Výpočet poměru R (vypočte se automaticky v automatickém koagulometru, případně v LIRS) :

 

                          Čas pacienta


RAPTT =                           

                              Čas kontroly

 

Hodnoty vydané koagulometrem (jako výsledek se udává průměr naměřených hodnot) jsou ověřeny, individuálně posouzeny, zaevidovány a expedovány z laboratoře.

 

Způsob vydávání výsledků:

Časy pacienta a kontroly v sekundách a jejich poměr R (hodnotu poměru APTT zaokrouhlete na dvě desetinná místa).

Výsledky se vydávají elektronickou cestou prostřednictvím NIS nebo v tištěné podobě, vždy podepsané odpovědnou osobou.

Archivace: denní kniha výsledků a žádanky na vyšetření po dobu 5 let, elektronicky v archivu LIS.

 

OSN-SReferenční a varovná rozmezíOSN-E

Fyziologické hodnoty:

Poměr R = 0,90 - 1,10 ( ± 4 s od normální kontroly)

 

OSN-SInterpretace výsledků, konzultační činnosti a hlášeníOSN-E

Klinické použití: APTT se využívá při diagnóze koagulopatií s poruchou vnitřního koagulačního systému. Prodloužené časy dostáváme u jaterních nemocí, při poruchách faktorů vnitřního koagulačního systému (VIII, IX, XI a XII), u hemofilií, při nedostatku vitamínu K, v přítomnosti látek s antitrombotickým účinkem. APTT však nepostihuje faktory VII a XIII a jakékoli změny v počtu či kvalitě trombocytů.

Tento test se též používá ke kontrole heparinové terapie (poměr R=2,0-4,0).

Pomocí APTT nelze sledovat podávání nízkomolekulárních heparinů!

 

OSN-SŘízení kvalityOSN-E

Pro denní kontrolu přesnosti se používá normální a patologická neatestovaná kontrolní plazma. Kontrola kvality (přesnosti) se provádí v pracovní dny dvakrát denně (ráno a odpoledne), o víkendu a o svátcích jednou denně.

Ke kontrole správnosti se použije normální a patologická atestovaná kontrolní plazma s deklarovaným rozmezím hodnot.

 

Reagencie pro kontrolu přesnosti:

Coag-Norm, katalogové číslo 00522, Diagnostica Stago

Balení: 100 x 1 ml

Příprava: obsah lahvičky naředit 1 ml vody pro injekce, nechat stát 30 minut při pokojové teplotě a poté jemně protřepat.

Identifikace reagencie v koagulometru:

ID: NORM             Název: COAG NORM                          Stabilita: 4 hod

 

Coag-Path, katalogové číslo 00523, Diagnostica Stago

Balení: 100 x 1 ml

Příprava: obsah lahvičky naředit 1 ml vody pro injekce, nechat stát 30 minut při pokojové teplotě a poté jemně protřepat.

Identifikace reagencie v koagulometru:

ID: PATH              Název: COAG PATH                           Stabilita: 4 hod

 

Reagencie pro kontrolu správnosti:

STA – System Control N+P, katalog. č. 00678, Diagnostica Stago

Balení: 2 x 12 x 1 ml

Příprava: obsah lahviček naředit 1 ml vody pro injekce, nechat stát 30 min při laboratorní teplotě, poté jemně promísit.

Identifikace reagencie v koagulometru:

Načíst kód reagencie (na lahvičkách).

 

Stabilita:

Coag-Norm, Coag-Path (naředěné)

15-19 °C

4 hodiny

System Control N+P (naředěné)

15-19 °C

8 hodin

 

OSN-SPoznámkyOSN-E

·         Hemolytickou, chylózní, ikterickou a zkoagulovanou plazmu netestujeme.

·         Centrifugace musí proběhnout za standardních podmínek, nedostatečná centrifugace vede k větší příměsi ve vyšetřované plazmě a tím k nestandardnímu APTT testu (příměs destičkových fosfolipidů).

·         Možným inhibitorem heparinu je destičkový faktor 4, který se po určité době může uvolňovat z krevních destiček. Přítomnost destičkového faktoru 4 (PF4)  ve  vyšetřované plazmě může ovlivnit výsledek testu.

Proto je nutné provést centrifugaci nesrážlivé krve vyšetřovaného pacienta nejpozději do hodiny od odběru krve.

·         Naředěné plazmy a reagencie nelze zamrazit.

 

OSN-SJiné související informaceOSN-E

Podávání nízkomolekulárních heparinů (např. Fraxiparinne, Fragmin, Clexan) lze sledovat metodami založenými na stanovení aktivity anti-Xa.

 

OSN-SLiteraturaOSN-E

1.        Langdell R. D. et al: Effect of antihemophilic factor on one-stage clotting tests. J. Lab. Clin. Med., 41, 1953, s. 637.

2.        Bell W. N., Alton H. G.: A brain extract as substitute for platelet suspensions in the tromboplastin generation test. Nature, 174, 1954, s. 880-881.

3.        Van Den Besselaar A. M. H. P. et al: Monitoring heparin therapy by the activated partial thromboplastin time – The effect of pre – analytical conditions. Thromb. Haemostasis, 57, 1987, s. 226-231.

4.        Brill – Edwards P. et al: Establishing a therapeutic range for heparin therapy. Ann. Intem. Med., 19,  1993, č. 2, s. 104-109.OSN-E

 

OSN-SAppendixyOSN-E

 

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

 

OSN-SRecenze, schváleníOSN-E

Autor dokumentu: RNDr. Hiemer František

Revize:

Schválil: