Abstrakt
Stanovení aktivovaného parciálního tromboplastinového času.
Funkce vnitřní cesty aktivace přeměny protrombinu na trombin – aktivace
látkou na bázi křemičitanu.
Seznam souvisejících
dokumentů
Kódy, názvy, definice a
terminologieOSN-E
NČLP:
03456 APTT (P, čas [s], koagulace)03461 APTT-kontrola
(P, čas [s],koagulace)03465 APTT-ratio (P, rel. čas [1], výpočet)
Seznam zdravotnických
výkonů
96621 Aktivovaný parciální
tromboplastinový test APTT
97111 Příprava plazmy a séra
centrifugací
Princip
V přítomnosti purifikovaných fosfolipidů
destičkového typu (
Místo
provádění postupu
Oddělení klinické biochemie Psychiatrické léčebny
v Opavě, pracoviště hematologie
Bezpečnostní
aspekty
Viz ”Směrnice
o bezpečnosti práce”.
Fáze
před vyšetřením
Základní koagulační test monitorující vnitřní
cestu aktivace přeměny protrombinu na trombin.
Odběr primárního vzorku a transport
Odebere se 9 dílů krve
do zkumavky z umělé hmoty s 1 dílem 0,109 mol/l (3,2%) citrátu
sodného.
Počet
zkumavek: 1
Minimální objem odběrové zkumavky: 3
ml.
Odebraný materiál je nutné co
nejrychleji transportovat do laboratoře při teplotě 18-25 °C, nejdéle do dvou
hodin od odběru.
Omezení
Laboratoř vzorky nepřijme nebo
neprovede vyšetření za podmínek uvedených v dokumentu „Odmítnutí přijetí biologického materiálu
k laboratornímu vyšetření“.
Manipulace
se vzorky
Příjem vzorku laboratoří: identifikace materiálu, zadání
do LIrS (přiřazení identifikačního čísla laboratoře).
Centrifugace citrátové krve: centrifugujeme 15
minut při 4000 otáčkách/min (přibližně 3000 g). Po odběru je plazma stabilní při 20 °C 4 hodiny, při heparinové terapii pouze 2 hodiny.
Plazma nesmí být skladována v lednici!
Přístroje
a pomůcky
Centrifuga Eppendorf, automatický koagulometr
Sysmex CA-540.
Reagencie
Set: PTT- Automate
5
Katalogové číslo: 00482, Diagnostica Stago
Balení: 12 x 10 ml reagencie PTT-Automate
(lyofilizovaná směs fosfolipidů z mozkové tkáně v pufrované suspenzi
křemičitanového aktivátoru s přidanými stabilizátory)
Reagencie neobsažené v setu:
CaCl2 0,025 mol/l
Stabilita:
Set PTT-Automate |
2-8 °C |
do exspirace |
Naředěná reagencie APTT |
15-19 °C |
96 hodin |
Naředěná reagencie APTT |
2-8 °C |
7 dní |
0,025 mol/l CaCl2 (po otevření) |
15-19 °C |
3 dny |
Spotřební
materiál
Štítky s čárovými kódy, kyvetky do
koagulometru
Příprava k činnosti
Příprava reagencií:Obsah
lahvičky reagencie PTT-Automate rozpustit v 10 ml vody pro injekce. Nechat stát
nejméně 60 minut při laboratorní teplotě a poté reagencii intenzivně
protřepat.Roztok kalcia je připraven k použití.
Identifikace reagencie v koagulometru:
APTT reagencie:
ID: PTTAUT
Název: PTT AUTOMATE
Stabilita: 96 hod Roztok CaCl2:
Pracovní
postup
Provedeme identifikaci vzorků, zkumavku
s vyšetřovanou plazmou vložíme do přístroje. Metodicky se postupuje dle
návodu přístroje
Nastavení automatického koagulometru |
|
|
Plazma |
50 µl |
|
Reagencie PTT-Automate |
50 µl |
|
Inkubace (37 °C) |
240 s |
|
0,025 mol/l CaCl2 |
50 µl |
|
Ihned po přidání
kalcia začít měřit koagulační čas |
Stručný popis postupu
Kalibrace
a návaznost
Nejméně 5x změříme referenční plazmu
s deklarovaným rozmezím hodnot APTT, vypočítáme průměr a tuto hodnotu
použijeme k výpočtu poměru.
Reagencie pro kalibraci:
Unicalibrator, katalogové č. 00625,
Diagnostica Stago
Balení: 6 x 1 ml
Příprava: obsah lahvičky naředit 1 ml vody pro
injekce, nechat stát 30 minut při laboratorní teplotě a poté jemně protřepat
Stabilita:
Unicalibrator (naředěný) |
15-19 °C |
4 hodiny |
Charakteristika
spolehlivostiOSN-E
Rozsah měření: 20-180 s
Dokumentace, zpracování dat a
vydávání výsledků
Výpočet poměru R (vypočte
se automaticky v automatickém koagulometru, případně v LIRS) :
Čas pacienta
RAPTT
=
Čas
kontroly
Hodnoty vydané koagulometrem (jako výsledek se
udává průměr naměřených hodnot) jsou ověřeny, individuálně posouzeny,
zaevidovány a expedovány z laboratoře.
Způsob vydávání výsledků:
Časy pacienta a kontroly v sekundách a jejich
poměr R (hodnotu poměru APTT zaokrouhlete na dvě desetinná místa).
Výsledky
se vydávají elektronickou cestou prostřednictvím NIS nebo v tištěné
podobě, vždy podepsané odpovědnou osobou.
Archivace: denní kniha
výsledků a žádanky na vyšetření po dobu 5 let, elektronicky v archivu LIS.
Referenční a varovná rozmezí
Fyziologické hodnoty:
Poměr R = 0,90 - 1,10 ( ± 4 s od normální kontroly)
Interpretace výsledků,
konzultační činnosti a hlášení
Klinické použití: APTT se využívá při
diagnóze koagulopatií s poruchou vnitřního koagulačního systému. Prodloužené
časy dostáváme u jaterních nemocí, při poruchách faktorů vnitřního koagulačního
systému (VIII, IX, XI a XII), u hemofilií, při nedostatku vitamínu K, v
přítomnosti látek s antitrombotickým účinkem. APTT však nepostihuje faktory VII
a XIII a jakékoli změny v počtu či kvalitě trombocytů.
Tento test se též používá ke kontrole heparinové
terapie (poměr R=2,0-4,0).
Pomocí APTT nelze
sledovat podávání nízkomolekulárních heparinů!
Řízení
kvality
Pro denní kontrolu přesnosti se používá normální a patologická
neatestovaná kontrolní plazma. Kontrola kvality (přesnosti) se provádí
v pracovní dny dvakrát denně (ráno a odpoledne), o víkendu a o svátcích
jednou denně.
Ke kontrole správnosti
se použije normální a patologická atestovaná kontrolní plazma
s deklarovaným rozmezím hodnot.
Reagencie pro kontrolu
přesnosti:
Coag-Norm, katalogové číslo
00522, Diagnostica Stago
Balení: 100 x 1 ml
Příprava: obsah lahvičky naředit 1 ml vody pro
injekce, nechat stát 30 minut při pokojové teplotě a poté jemně protřepat.
Identifikace reagencie
v koagulometru:
ID: NORM Název:
COAG NORM Stabilita:
4 hod
Coag-Path, katalogové číslo
00523, Diagnostica Stago
Balení: 100 x 1 ml
Příprava: obsah lahvičky naředit 1 ml vody pro
injekce, nechat stát 30 minut při pokojové teplotě a poté jemně protřepat.
Identifikace reagencie
v koagulometru:
ID: PATH Název:
COAG PATH Stabilita:
4 hod
Reagencie pro kontrolu správnosti:
STA – System Control
N+P, katalog.
č. 00678, Diagnostica Stago
Balení: 2 x 12 x 1 ml
Příprava: obsah lahviček naředit 1 ml vody pro
injekce, nechat stát 30 min při laboratorní teplotě, poté jemně promísit.
Identifikace reagencie
v koagulometru:
Načíst kód reagencie (na lahvičkách).
Stabilita:
Coag-Norm, Coag-Path (naředěné) |
15-19 °C |
4 hodiny |
System Control N+P (naředěné) |
15-19 °C |
8 hodin |
Poznámky
·
Hemolytickou, chylózní, ikterickou a zkoagulovanou plazmu netestujeme.
·
Centrifugace musí proběhnout za standardních podmínek, nedostatečná
centrifugace vede k větší příměsi ve vyšetřované plazmě a tím
k nestandardnímu APTT testu (příměs destičkových fosfolipidů).
·
Možným inhibitorem heparinu je destičkový faktor 4, který se po určité
době může uvolňovat z krevních destiček. Přítomnost destičkového faktoru 4
(PF4) ve vyšetřované plazmě může
ovlivnit výsledek testu.
Proto je nutné provést
centrifugaci nesrážlivé krve vyšetřovaného pacienta nejpozději do hodiny od
odběru krve.
·
Naředěné plazmy a reagencie nelze zamrazit.
Jiné
související informace
Podávání nízkomolekulárních heparinů (např.
Fraxiparinne, Fragmin, Clexan) lze sledovat metodami založenými na stanovení
aktivity anti-Xa.
Literatura
1.
Langdell R. D. et al: Effect of antihemophilic factor on one-stage
clotting tests. J. Lab. Clin. Med., 41, 1953, s. 637.
2.
Bell W. N., Alton H. G.: A brain extract as substitute for platelet
suspensions in the tromboplastin generation test. Nature, 174, 1954, s.
880-881.
3.
Van Den Besselaar A. M. H. P. et al: Monitoring heparin therapy by the
activated partial thromboplastin time – The effect of pre – analytical
conditions. Thromb. Haemostasis, 57, 1987, s. 226-231.
4.
Brill – Edwards P. et al: Establishing a therapeutic range for heparin
therapy. Ann. Intem. Med., 19, 1993, č.
2, s. 104-109.
Appendixy
Autorské poznámky
Recenze, schválení
Autor dokumentu:
RNDr. Hiemer František
Revize:
Schválil: