Abstrakt
Stanovení fukózy enzymaticky
v semenných váčcích a je hlavní disacharid, který je zdrojem energie
spermií. Její produkce je regulována testosteronem soupravou Fruktóza firmy
BioSystem na analyzátoru Cobas Integra 400 plus..
Seznam souvisejících dokumentů
a textů
Kódy a názvy v různých
klasifikačních systémech
Frukóza, FRU, LIRS 14. Seznam zdravotních výkonů: rutina
81 429.
Princip
Fruktóza vzniká podle
reakce popsané níže, NADPH může být
měřen spektrofotometricky
D-frukóza + ATP¾¾¾¾HK¾¾¾¾® frukoso-6-fosfát + ADP
G6PDH
frukoso-6-fosfát ¾¾¾¾¾¾¾¾®
Glulóza-6-fosfát
Glukźa-6-fosfát
+ NADP+ ¨ ®
množství vytvořeného NADH je přímo úměrné koncentraci glukózy a dá se stanovit měření
nárůst absorbance při 340 nm.
Definice a terminologie
Rutinní, doporučená SKB ČLS JEP, používá se reagenční kazeta COBAS INTEGRA
devepopnent chanel 1 obsahuje in vitro diagnostický systém, navržený pro
použití na analyzátoru COBAS INTEGRA 400 pro kvantitativní stanovení
koncentrace fruktózy v semenné plazmě.
katalogové číslo BioSysrens 11794.
Souprava je uložena v lednici, místnost biochemie.
Tento
příbalový list popisuje aplikace pro stanovení v semenné plazmě
Místo provádění postupu
Oddělení klinické biochemie
Psychiatrické nemocnice v Opavě, Olomoucká 88, 746 01 Opava
Bezpečnostní aspekty
Je nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle ČSN
01 8003, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem
přenosu některých infekcí. To platí zejména pro zneškodňování a likvidaci
použitých souprav a odpadního (biologického) materiálu. Zejména je třeba
zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné pracovní
prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci
a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit
vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí vymývat 15 minut proudem vlažné
vody. Při zasažení oděvu a kůže odložit kontaminované šaty. Okamžitě omýt kůži
velkým množstvím pokud možno vlažné vody, popř. mýdlem nebo jiným mycím
prostředkem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru
vlažné vody a vyhledat lékařskou pomoc.
Teorie, použití, preanalytické požadavky
Fruktóza je hlavní
sacharid semenných váčků a je zdrije energie spermií. Je syntetizována
v epitelových buňkách z krevní glukózy a její produkce je regulována
testosteronem.
Koncentrace
fruktózy z na stavu semenných váčků a na normální hladině hormonů.
Koncentrace fruktózy v semenné tekutiny odráží stav sekreční žlázy. Nízké
hodnoty ukazují na obstrukci ejakulačních vývodů nebo na změny semenných váčků
a závisí na jejich stavu.
- časová dostupnost výsledku: výsledky jsou k dispozici 3 hodin od přijetí materiálu.
- ekonomické náklady: cena
jednoho vyšetření 14,27 Kč.
- po zavedení metody do
rutinního provozu provádí stanovení kvalifikovaný laborant.
- požadavky na spolehlivost
měřícího systému
Znaky analytické metody
Mez stanovitelnosti linearita
do hodnoty 55,0 mmo/l, při vyšších hodnotách řeďte destilovanou vodou a
výdledek násobte2x.
Diskriminační mezLimitace-interference kritérium –
výtěžnost ±
10% výchozí hodnoty.
Analytická citlivost 4,8x10-2 DA/min na 1 mmol/l glukózy
Mez detekce 0,2mmol/l
Metodické srovnání
Mez detekce
Limitace-interference kritérium:výtěžnost ± 10% výchozí hodnoty.
Opakovatelnost v sérii
Celková
koncentrace CV n
6,8 mmol/l 1,4% 20
27,3 mmol/l 0,6% 20
Reprodukovatelnost
Celková
koncentrace CV n
6,8 mmol/l 2,0% 25
27,3 mmol/l 3,0% 25
Odběr materiálu
Odběr se provýdí per onaniam
v laboratoři, výjímečně doma (možnost ovlivnění )
Interferující látky:
hemolýza bez
signifikantní interference
ikterus bez signifikantní
interference
lipemie bez signifikantní
interference
-
Manipulace s materiálem
Podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem.
Vzorek se nechá min. 30 ztekucovat.
Přístroje a pomůcky
Cobas Integra 400 plus
Reagencie
Souprava obsahuje :
·
činidlo R1 (lahvička A 40 ml a B
10 ml )
Činidlo R1 (lahvička
A) PIPES 70 mmol/ hexokináza >15
kIl, izomeráza fosfoglikózy >
kIl/l, konzervační čidisla, pH 1
Činidlo R2 ATP 1 x 10 ml ATP > >10kU/l, konzervační činidla, pH 9.
Činislo S standard 1x3 ml D-fruktźa
75 mg/dl. Což odpovídí 208 mmol/l friktozy v souladu s faktorek
ředěví vzorku. Vplný primární standard.
Všechny roztoky se používají s ohledem na jejich exspiraci,
likviduje běžným způsobem podle
místních předpisů.
Činidla jsou stabilní při 2-8°C do vyznačené doby exspirace,v přístroji 8 týdnů.
Spotřební materiál
Kalíšky typu Eppendorf.
Kalibrace
Ke kalibraci se využívá přípravek
přiložený k soupravě.. Je to lyofilizované kalibrační sérum, na
bázi lidského séra. Koncentrace a aktivity byly vybrány tak, aby zajistily
optimální kalibraci automatických analyzátorů, které nepoužívají kontinuální
průtokový systém. Specifikované standardní hodnoty jsou mediánem získaných
hodnot.
Po opatrném otevření lahvičky 1, aby se zabránilo jakékoliv ztrátě
lyofilizátu, se přidají přesně 3 ml redestilované vody. Lahvička se pečlivě
uzavře a obsah se rozpustí během 30 minut, za občasného opatrného promíchání
kroužením lahvičky tak, aby se zabránilo pěnění. Netřepe se.
Kalibrátor v lyofilizovaném stavu je stabilní do data na obalu. Po
rozpuštění jsou složky kalibrátoru stabilní nejméně 8 hodin při laboratorní
teplotě, 2 dny při 4 °C a 1 měsíc při
-20 °C, pokud bylo jednou zamraženo. Kalibrátor byl připraven z krve dárců,
testovaných individuálně na přítomnost HBsAG, HCV a HIV protilátek. Je nutné s
ním zacházet podle pravidel o bezpečnosti práce s biologickým materiálem.
Kalibrační závislost je lineární, přímka prochází počátkem. Koncentrace
závisí na šarži a vybrané metodě - metoda glukóza. Kalibrační funkce se
vypočítává pomocí software analyzátoru. Rekalibrace se provádí na základě
výsledků kontrol správnosti. Způsob kalibrace je lineární regrese. Kalibrační
data se automaticky archivují v software analyzátoru, vytištěné záznamy se
průběžné ukládají do desek "Kalibrace metod".
Pracovní postup
Standard nevyzaduje přípravu.
Semenná plazms 200
µl
Destilovaná voda 800
µl
Pracovní
reagent B přeneste kvantivativně do láhvičky s reagenciíe, A a
jemně promíchejte Jiné objemy reagentu A mohou být připraveny v poměru 4 +
l.. Rpztok je dtabilní . měsíce při teplotě 2 – 8o. Reagencie
otevřené a umístění v chlazeném prostoru analyzátorujsou stabilní 3 měsíce
Vzorky jsou měřeny při vnové délce
A/B 340/670 nm . Při koncentraci vyšší než měřící rozsah je výsledek označen
kódem pro opakovaní měření z naředěného vzorku.Pipetuje se 2 µl séra.
Dokumentace, zpracování a
hodnocení dat
Celková koncentrace fruktósy jistí výpočtem podle optimální kalibrační
křivky pomocí software analyzátoru.
Způsob vydávání výsledků
Hodnoty se udávají na jedno desetinné místo, v mmol/l, po kontrole na oddělení. Výsledky se vydávají
v papírové formě,
Řízení kvality
Jako kontrolní materiál se používá fertilitní Biochemickou kontroly firmy
BioSystém ‚ kód18053)Urine.
Kontroly vyhodnocuje podle Westgardových pravidel provozní chemik, který
v případě nevyhovující kvality podniká určitá opatření: výměnu reagencií, kontrolu analyzátoru,
atd. Výsledky kontrol jsou ukládány do paměti analyzátoru, vytištěny a uloženy do desek "kontrola metod".
Externí kontrola kvality v rámci České republiky je organizována SEKK a naše
laboratoř se jí účastní 2-krát až
4-krát do roka.
Klinické údaje
Referenční teploty:> 8,33 mmol/l
Poznámky
Jiné související informace
Literatura
Pracovní návod soupravy Fruktóza
Masopust J.: Požadování a hodnocení biochemických
vyšetření, Avicenum, 1990
Appendixy
Stručný popis postupu
Obsluha provede kontrolu reagencií, kalibraci metod a následnou kontrolu
metod (kontrolu provádí vysokoškolský určený pracovník). Analyzovaný
materiál se umístí do určených stojánků
buď pomocí čárových kódů přímo vytištěných pro daný materiál nebo při
plánovacím způsobu do předem připravených zkumavek označených čárovým kódem.
Požadavky analýz se předají do Cobas Integra on-line z počítače a po
provedení analýzy se převedou elektronicky zpět.Tyto výsledky jsou uchovávány
v systému LIRS.
Autorské poznámky
Doporučení,
recenze, schválení
Autor a
spoluautoři: RNDr František Hiemer
Recenze: pracovník firmy
BioSystem:
Revize: