OSN-SAbstraktOSN-E

Stanovení fukózy enzymaticky v semenných váčcích a je hlavní disacharid, který je zdrojem energie spermií. Její produkce je regulována testosteronem soupravou Fruktóza firmy BioSystem na analyzátoru Cobas Integra 400 plus..

 

 OSN-SSeznam souvisejících dokumentů a textů

OSN-E

 

OSN-SKódy a názvy v různých klasifikačních systémechOSN-E

Frukóza, FRU, LIRS 14. Seznam zdravotních výkonů:  rutina   81 429.

 

OSN-SPrincipOSN-E

                                                                               

Fruktóza vzniká podle reakce popsané  níže, NADPH může být měřen spektrofotometricky

 

D-frukóza + ATP¾¾¾¾HK¾¾¾¾® frukoso-6-fosfát + ADP 

                                                G6PDH

frukoso-6-fosfát   ¾¾¾¾¾¾¾¾®    Glulóza-6-fosfát

 

Glukźa-6-fosfát + NADP+ ¨                         ®

 

množství vytvořeného NADH je přímo úměrné koncentraci glukózy a dá se stanovit měření

nárůst absorbance při 340 nm.

 

                                               

OSN-SDefinice a terminologieOSN-E

Rutinní, doporučená SKB ČLS JEP, používá se reagenční kazeta COBAS INTEGRA devepopnent chanel 1 obsahuje in vitro diagnostický systém, navržený pro použití na analyzátoru COBAS INTEGRA 400 pro kvantitativní stanovení koncentrace fruktózy v semenné plazmě.  katalogové číslo BioSysrens 11794. Souprava je uložena v lednici, místnost biochemie.

Tento příbalový list popisuje aplikace pro stanovení v semenné plazmě

 

OSN-SMísto provádění postupuOSN-E

Oddělení  klinické biochemie Psychiatrické nemocnice v Opavě, Olomoucká 88, 746 01 Opava

 

 

OSN-SBezpečnostní aspektyOSN-E

Je nutné dodržovat obecné zásady bezpečnosti práce podle ČSN 01 8003, ale i zásady práce s biologickým materiálem, který může být zdrojem přenosu některých infekcí. To platí zejména pro zneškodňování a likvidaci použitých souprav a odpadního (biologického) materiálu. Zejména je třeba zachovávat pravidla osobní hygieny, používat osobní ochranné pracovní prostředky (oděv, obuv a podobně), při práci nejíst, nepít a nekouřit. Po práci a před jídlem omýt pokožku především rukou teplou vodou a mýdlem a ošetřit vhodným reparačním krémem. Při zasažení očí vymývat 15 minut proudem vlažné vody. Při zasažení oděvu a kůže odložit kontaminované šaty. Okamžitě omýt kůži velkým množstvím pokud možno vlažné vody, popř. mýdlem nebo jiným mycím prostředkem. Při náhodném požití vypláchnout ústa, dát vypít asi 1/2 litru vlažné vody a vyhledat lékařskou pomoc.

 

OSN-STeorie, použití, preanalytické požadavkyOSN-E

 

Fruktóza je hlavní sacharid semenných váčků a je zdrije energie spermií. Je syntetizována v epitelových buňkách z krevní glukózy a její produkce je regulována testosteronem.

Koncentrace fruktózy z na stavu semenných váčků a na normální hladině hormonů. Koncentrace fruktózy v semenné tekutiny odráží stav sekreční žlázy. Nízké hodnoty ukazují na obstrukci ejakulačních vývodů nebo na změny semenných váčků a závisí na jejich stavu.

Analytická proveditelnost

-    časová dostupnost výsledku: výsledky jsou k dispozici  3 hodin od přijetí materiálu.

-     ekonomické náklady: cena jednoho vyšetření 14,27 Kč.

-     po zavedení metody do rutinního provozu provádí stanovení kvalifikovaný laborant.

-     požadavky na spolehlivost měřícího systému

 

OSN-SZnaky analytické metodyOSN-E

Mez stanovitelnosti                             linearita do hodnoty 55,0 mmo/l, při vyšších hodnotách řeďte destilovanou vodou a výdledek násobte2x.

Diskriminační mezLimitace-interference                        kritérium – výtěžnost ± 10% výchozí hodnoty.

Analytická citlivost                            4,8x10-2 DA/min na 1 mmol/l glukózy

Mez detekce                                          0,2mmol/l

Metodické srovnání

Mez detekce                                         

Limitace-interference                         kritérium:výtěžnost ± 10% výchozí hodnoty.

 

Opakovatelnost v sérii

                Celková koncentrace           CV                           n

               

6,8 mmol/l                               1,4%                       20

                        27,3 mmol/l                    0,6%                       20

 

Reprodukovatelnost                           

 

                Celková koncentrace           CV                           n

               

6,8 mmol/l                               2,0%                       25

                        27,3 mmol/l                    3,0%                       25

 

 

OSN-SOdběr materiáluOSN-E

Odběr se provýdí per onaniam v laboratoři, výjímečně doma (možnost ovlivnění )

Interferující látky:

Sérum, plazma

hemolýza                 bez signifikantní interference

ikterus                                bez signifikantní interference

lipemie                                bez signifikantní interference

-           

 

OSN-SManipulace s materiálemOSN-E

Podle běžných zásad práce s biologickým infekčním materiálem.

Vzorek se nechá min. 30 ztekucovat.

OSN-SPřístroje a pomůckyOSN-E

Cobas Integra  400 plus

OSN-SReagencieOSN-E

 

 

 

Souprava obsahuje :

·  činidlo  R1 (lahvička A 40 ml a B 10 ml )

 

Činidlo R1 (lahvička A)     PIPES 70 mmol/ hexokináza >15 kIl, izomeráza fosfoglikózy > kIl/l, konzervační čidisla, pH 1

 

Činidlo R2  ATP 1 x 10 ml ATP > >10kU/l, konzervační činidla, pH 9.

 

Činislo S standard 1x3 ml D-fruktźa 75 mg/dl. Což odpovídí 208 mmol/l friktozy v souladu s faktorek ředěví vzorku. Vplný primární standard.

               

 

Všechny roztoky se používají s ohledem na jejich exspiraci, likviduje  běžným způsobem podle místních předpisů.

 

Činidla jsou stabilní při 2-8°C do vyznačené doby exspirace,v přístroji  8 týdnů.

 

OSN-SSpotřební materiálOSN-E

Kalíšky typu Eppendorf.

 

OSN-SKalibraceOSN-E

Ke kalibraci se využívá přípravek  přiložený k soupravě.. Je to lyofilizované kalibrační sérum, na bázi lidského séra. Koncentrace a aktivity byly vybrány tak, aby zajistily optimální kalibraci automatických analyzátorů, které nepoužívají kontinuální průtokový systém. Specifikované standardní hodnoty jsou mediánem získaných hodnot.

 

Příprava

Po opatrném otevření lahvičky 1, aby se zabránilo jakékoliv ztrátě lyofilizátu, se přidají přesně 3 ml redestilované vody. Lahvička se pečlivě uzavře a obsah se rozpustí během 30 minut, za občasného opatrného promíchání kroužením lahvičky tak, aby se zabránilo pěnění. Netřepe se.

 

Stabilita

Kalibrátor v lyofilizovaném stavu je stabilní do data na obalu. Po rozpuštění jsou složky kalibrátoru stabilní nejméně 8 hodin při laboratorní teplotě, 2 dny při 4 °C a 1 měsíc při

-20 °C, pokud bylo jednou zamraženo. Kalibrátor byl připraven z krve dárců, testovaných individuálně na přítomnost HBsAG, HCV a HIV protilátek. Je nutné s ním zacházet podle pravidel o bezpečnosti práce s biologickým materiálem.

 

Vlastní kalibrace

Kalibrační závislost je lineární, přímka prochází počátkem. Koncentrace závisí na šarži a vybrané metodě - metoda glukóza. Kalibrační funkce se vypočítává pomocí software analyzátoru. Rekalibrace se provádí na základě výsledků kontrol správnosti. Způsob kalibrace je lineární regrese. Kalibrační data se automaticky archivují v software analyzátoru, vytištěné záznamy se průběžné ukládají do desek "Kalibrace metod".

 

OSN-SPracovní postupOSN-E

 

Standard nevyzaduje přípravu.

  1. Pipetujeme do zlumavky:

 

 

 


Semenná plazms                                                                   200 µl

 

Destilovaná voda                                                                 800 µl

 

Pracovní  reagent B přeneste kvantivativně do láhvičky s reagenciíe, A a jemně promíchejte Jiné objemy reagentu A mohou být připraveny v poměru 4 + l.. Rpztok je dtabilní . měsíce při teplotě 2 – 8o. Reagencie otevřené a umístění v chlazeném prostoru analyzátorujsou stabilní 3 měsíce Vzorky jsou měřeny při vnové délce A/B 340/670 nm . Při koncentraci vyšší než měřící rozsah je výsledek označen kódem pro opakovaní měření z naředěného vzorku.Pipetuje se 2 µl séra.

 

 

OSN-SDokumentace, zpracování a hodnocení datOSN-E

Celková koncentrace fruktósy jistí výpočtem podle optimální kalibrační křivky pomocí software analyzátoru.

 

OSN-SZpůsob vydávání výsledkůOSN-E

Hodnoty se udávají na jedno desetinné místo, v mmol/l, po kontrole na oddělení. Výsledky se vydávají v  papírové formě,

 

OSN-SŘízení kvalityOSN-E

Jako kontrolní materiál se používá fertilitní Biochemickou kontroly firmy BioSystém ‚ kód18053)Urine.

Kontroly vyhodnocuje podle Westgardových pravidel provozní chemik, který v případě nevyhovující kvality podniká určitá opatření: výměnu reagencií, kontrolu analyzátoru, atd. Výsledky kontrol jsou ukládány do paměti analyzátoru, vytištěny a uloženy do desek "kontrola metod". Externí kontrola kvality v rámci České republiky je organizována SEKK a naše laboratoř se jí účastní 2-krát až 4-krát do roka.

 

OSN-SKlinické údajeOSN-E

Referenční hodnoty

Referenční teploty:> 8,33 mmol/l

OSN-SPoznámkyOSN-E

 

OSN-SJiné související informaceOSN-E

 

OSN-SLiteraturaOSN-E

Pracovní návod soupravy Fruktóza

Masopust J.: Požadování a hodnocení biochemických vyšetření, Avicenum, 1990

  1. Schidr FH.: Die enzymatische beszimmung von glucose inf fructuse nebebenader. Klin Wschr. 196. 39:1422-124.
  2. 2. Bergmayer HU Metods Enzymatisc Analysis, ed Nergmayer HI Acaddemic Press, NZ 1974. 3:1196-1201
  3. Poirot Cemau. Interfilidad masculina, Sspectosclinicos e invesigaciones biologicas. Acte ER, Burns DE. WB Sunders Co. 2005
  4. Tients texbook clinical chemistry an Meolecular diagnostics, 4 th ed. Burtis CA, Ashwood ER, Burns DE, WB Sunders CO 2005
  5. WHO Laboratory manual for the examination of human semen and spermcervical mucus interactio. Cambridce university press, 4th ad. 1999

OSN-SAppendixyOSN-E

 

OSN-SStručný popis postupuOSN-E

 

Obsluha provede kontrolu reagencií, kalibraci metod a následnou kontrolu metod (kontrolu provádí vysokoškolský určený pracovník). Analyzovaný materiál  se umístí do určených stojánků buď pomocí čárových kódů přímo vytištěných pro daný materiál nebo při plánovacím způsobu do předem připravených zkumavek označených čárovým kódem. Požadavky analýz se předají do Cobas Integra on-line z počítače a po provedení analýzy se převedou elektronicky zpět.Tyto výsledky jsou uchovávány v systému LIRS.

 

OSN-SAutorské poznámkyOSN-E

 

OSN-SDoporučení, recenze, schváleníOSN-E

Autor a spoluautoři: RNDr František Hiemer

Recenze: pracovník firmy BioSystem:

Revize: